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Dth

Los Linfocitos T colaboradores (del inglés T helper) son una subpoblación de linfocitos T que juega un papel central en la coordinación de la respuesta inmunitaria. Estas células se caracterizan por colaborar junto con los linfocitos B y los linfocitos T citotóxicos en la inducción de respuestas humorales y celulares respectivamente, así como por su capacidad para participar en la activación de las células dendríticas, mejorando la presentación antigénica. Debido a este papel central, las diferentes estrategias de vacunación encaminadas a la inducción de respuestas humorales o celulares pasan por la activación de esta población celular. Esta población de linfocitos T reconoce los antígenos tras su procesamiento en forma de péptidos de 12-15 aminoácidos, denominados determinantes T helper (DTh), presentados por las moléculas de HLA de clase II. El conjunto de péptidos presentado por una molécula HLA de clase II dada se caracteriza porque presenta aminoácidos concretos en determinadas posiciones denominadas puntos de anclaje, lo que permiten definir en la secuencia de estos péptidos lo que se ha denominado como “motivos de unión”. La caracterización de los péptidos capaces de unirse a las diferentes moléculas HLA ha permitido definir los motivos de unión correspondientes a muchas de ellas. Gracias al conocimiento de los motivos de unión y mediante la utilización de programas informáticos se han descrito muchos DTh pertenecientes a una gran variedad de antígenos, tanto proteínas derivadas de tumores de como de agentes infecciosos. Estos DTh así caracterizados presentarían un gran utilidad en estrategias de vacunación basadas en subunidades, es decir, fragmentos antigénicos.

Una de las principales características de la respuesta mediada por linfocitos T es la restricción impuesta por las moléculas HLA, es decir, dependiendo de la molécula HLA responsable de la presentación, distintas zonas de un antígeno son presentadas para su reconocimiento. Esto hace que en el caso de las vacunas de subunidades, habría que caracterizar los DTh de cada antígeno para cada una de las moléculas HLA, o para las más comunes. Recientemente se ha descrito en algunos antígenos la presencia de péptidos DTh promiscuos, es decir, capaces de unirse y ser presentados por un número alto de moléculas de HLA, por lo que podrían ser útiles en un espectro amplio de la población.

La presente invención se centra en el diseño y caracterización de nuevos DTh promiscuos. Una característica importante de estos nuevos DTh es que son quiméricos, presentan secuencias de nuevo diseño, que no pertenecen a antígenos naturales. Para su diseño se analizaron los motivos de unión de varias de las moléculas HLA-DR más comunes y se sintetizó una serie de péptidos que cumplieran dichos requisitos. Se analizó in vitro la capacidad de unión de los péptidos sintetizados a siete moléculas HLA-DR (HLA-DRB1*0101, HLA-DRB1*1501, HLA-DRB1*0302, HLA-DRB1*0401, HLA-DRB1*0701, HLA-DRB1*0802 y HLA-DRB1*1101) y se escogieron para el análisis de su inmunogenicidad aquellos que se unieron con mayor afinidad a un número más alto de estas moléculas. La inmunogenicidad se estudió primero in vivo, en un modelo de ratones transgénicos que expresa la moléculas humanas HLA-DRB1*0401, y se pudo demostrar la capacidad de estos DTh para inducir respuestas de linfocitos T (proliferación y liberación de citoquinas) así como para ayudar en la inducción de respuestas T citotóxicas. En segundo lugar se analizó la inmunogenicidad in vitro, utilizando linfocitos de sangre periférica de un conjunto de individuos con diferentes moléculas HLA-DR. Estos experimentos demostraron que la utilización conjunta de tres de los DTh caracterizados fue capaz de inducir respuestas de linfocitos T en más del 90% de los individuos estudiados.

Todos estos resultados sugieren que estos péptidos DTh promiscuos podrían ser de gran utilidad para la inducción de respuestas de linfocitos T colaboradores y como consecuencia de ello, para la potenciación de otras respuestas inmunitarias de importancia en vacunación e inmunoterapia. El hecho de poder ser presentadas por una gran variedad de moléculas HLA de clase II, como ya se ha demostrado en diferentes experimentos, permite además su utilización en un espectro muy amplio de la población.

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